一步帮您解决SILAC细胞培养的苦恼

大家好小编又与大家见面了，最近小编不断收到科研同仁们对SILAC定量蛋白质组学服务的问题，其中对于SILAC细胞培养尤其关注。所以今天，小编愿意将关于SILAC细胞培养的心得与大家分享。

看官们先别着急，小编先来简要介绍一下SILAC技术。

细胞培养稳定同位素标记技术（SILAC）是在细胞培养过程中，利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术，对蛋白表达进行定量分析的一种新技术。它不仅可以对蛋白质进行定性分析，还可通过质谱图上一对轻-重稳定同位素峰的比例来反映对应蛋白在不同状态下的表达水平，实现对蛋白质的精确定量。

SILAC的技术优势

1、SILAC不需要对肽段进行同位素标记；

2、因为标记氨基酸可以100%的渗入到细胞的蛋白中，所以不存在样品的标记效率问题；

3、因为蛋白质被均一的标记，所以蛋白中各个肽段都可以对蛋白进行定量，相互作证；

4、SILAC标记对细胞生长无影响：不影响细胞形态，不影响细胞对数生长期，不影响细胞分化；

5、肽段液相行为一致，可以共洗脱。

好啦，进入正题。培养细胞，当然要有原料。

关于培养基的选择

由于SILAC技术是通过细胞培养进行稳定同位素标记，所以我们需要轻标培养基（lightmedium）和带有稳定同位素标记的重标培养基（heavy medium）。

轻标培养基就是我们平时培养细胞用的正常培养基，比如DMEM、MEM和1640。而正常培养基中去掉了精氨酸（Arg）和赖氨酸（Lys），换之以13C标记的精氨酸和赖氨酸，就成了重标培养基。

注意：为保证稳定同位素标记效率，建议直接从相关公司购买重标培养基。切记实验之前一定要将所有培养基准备充足。

关于细胞培养

我们需要把细胞分成两部分，一部分使用轻标培养基培养，另一部分使用重标培养基培养，除此之外，其它操作步骤完全一致。

当然了，细胞经过6~7个倍增周期之后，用重标培养基培养的细胞中，稳定同位素标记的氨基酸就可以完全渗入到细胞新合成的蛋白中取代了原有氨基酸。小编建议当在这之后还需要进行标记效率检测，以保证标记效率符合SILAC技术要求，景杰生物拥有优质的技术可以帮您进行检测哦~~~

如果需要进行药物处理或者条件刺激，为了方便，建议选择在轻标培养的细胞中进行，作为实验组。因为重标细胞分子量大负担重，受到刺激有可能反应不明显。

关于寄送样品的量

1、SILAC定量蛋白质组学：若提供希望样品，收集细胞沉淀，PBS冲洗三遍，需要5 X10⁶ 或细胞沉淀不少于50 μL。

2、SILAC修饰定量组学：相比于普通组学，修饰组学对蛋白需求量较大。需要5 X10⁷ 或细胞沉淀不少于500μL。磷酸化修饰定量送样量位2 X10⁷ 或细胞沉淀不少于200μL。

最后，希望小编的上述经验能够帮助到各位看官！

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