邹文安
小编按语
最近师妹常跟我说，每天细心的呵护自己的SILAC标记细胞心力交瘁，为什么还是死了呢，一夜面容交瘁，心情老不美好了，这一脸暗斑加坏脾气肯定嫁不出去了。
怎么办？
师兄要发大招了，总结了这么多年，给师妹倾囊相授，下个七夕能约吗？
小妙招一：细心是提高SILAC标记的关键
关于SILAC如何标记的细节，我就不详述了，已有多篇文章详述师妹可以参考。
可是实验总是不像protocol上说的容易，以下几个细节性的操作师妹一定要注意。
1） 待标记细胞状态良好后开始SILAC标记；
2） 根据细胞生长的速度不同，调整细胞传代密度，一般2-3天传代一次；
3） 一般标记7代完成时进行标记效率检测，标记完成的细胞需保种待后续实验使用。
4） 注意：标记过程中请记录是第几次传代，可用P1代、P2代等作记号。培养细胞时培养皿可参考标记图示如下：为防止标记细胞弄混，请将培养皿底部也作相应轻重标标记（圆形代表培养皿）。
小妙招二：观察，观察，观察
另外师妹在SILAC标记过程中，重标氨基酸或透析血清的使用可能会对某些特殊细胞的形态及生长状态造成影响。为了评估实验，不要最后关头才知道前面的努力前功尽弃，标记期间更要注意观察。
1） 随标记代数的增加，若标记细胞状态逐渐变差，请考虑更换细胞系或更改实验方案。
2) 对于特殊细胞系或不适合使用透析血清的细胞系，可使用其专有血清或正常胎牛血清替代，可能只是稍微降低其细胞标记效率。
3) 在标记过程中，重标细胞组的细胞生长速度会略低于正常轻标细胞组，需注意传代，尽量调整传代保持同步性进行后期生物学实验处理。
小妙招三：不多不多，这点细胞就够了
1) 全蛋白组定量：300μg蛋白/单标，约50μL细胞沉淀体积，约2个10cm培养皿的细胞量；
2) 修饰组学定量：8mg蛋白/单标，约350μL细胞沉淀体积，约6个15cm培养皿的细胞量；
3) 但具体情况视培养的细胞大小、收集时细胞密度等情况酌情考虑。
景杰生物（PTM Biolabs）凭借其强大的研发实力，提供独家开发的高灵敏度蛋白质修饰抗体及基于高等级质谱以的高通量蛋白质组学及修饰组学技术服务，有效的推动蛋白质组学及修饰组学研究进展。此外，景杰生物还提供全球最多种类的蛋白质修饰组学技术服务，包括赖氨酸乙酰化 (acetylation)、甲基化 (methylation)、泛素化 (ubiquitination)、磷酸化 (phosphorylation)、O-乙酰氨基葡萄糖化 (O-GlcNAc)、赖氨酸琥珀酰化 (succinylation)、巴豆酰化 (crotonylation)、丙酰化(propionylation) 等。
本文由景杰蛋白原创编辑，欢迎转载